¿¬±¸¸¶´ç

±èÅÃÈÆ
CRISPR-Cas: À¯ÀüÀÚ ÆíÁý ¹× À¯ÀüÀÚÄ¡·á¸¦ ³Ñ¾î
±èÅÃÈÆ Çѱ¹°úÇбâ¼ú¿¬±¸¿ø (KIST)
È­ÇÐÅ°³ë¹Í½º¿¬±¸¼¾ÅÍ ¸ÞÀÏ tackhoon@kist.re.kr

CRISPR-Cas¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ À¯ÀüÀÚ ÆíÁý ±â¼úÀº À¯ÀüÀÚÄ¡·á ºÐ¾ß¿¡¼­ Çõ¸íÀû º¯È­¸¦ ÀÏÀ¸Å°°í ÀÖ´Ù. Áö±Ý ÀÌ ±ÛÀ» ÀаíÀÖÀ» Á¤µµ·Î »ý¸í°úÇп¡ °ü½ÉÀÌ ÀÖ´Ù¸é CRISPR-Cas¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ À¯ÀüÀÚ ÆíÁý ±â¼ú¿¡ ´ëÇØ ÃæºÐÈ÷ Àß ¾Ë°í ÀÖÀ» °ÍÀ̶ó »ý°¢ÇÑ´Ù (µû·Î ¼Ò°³°¡ ÇÊ¿äÇÏ´Ù¸é 2017³â 12¿ù Ưº°±â°í "CRISPR-Cas ½Ã½ºÅÛ ¿¬±¸ÀÇ ÃֽŠµ¿Çâ: À¯Àüü, ÈļºÀ¯Àüü ¹× RNA ÆíÁý"À» Âü°íÇÏ±æ ¹Ù¶õ´Ù.)

ÇÊÀÚ´Â CRISPR-Cas¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ ½Å¾à Ÿ°Ù ¹ß±¼ ¿¬±¸¸¦ ÁÖ·Î ÇÏ°íÀִµ¥, ¿¬±¸¿¡ ´ëÇØ À̾߱âÇÏ´Ù º¸¸é, ¸¹Àº À̵éÀÌ À¯ÀüÀÚÄ¡·á °ü·Ã ÀÏÀ» ÇÏ°íÀÖ´Â °ÍÀ¸·Î »ý°¢ÇÏ°ï ÇÑ´Ù. ÇÏÁö¸¸ CRISPR-Cas´Â ´Ü¼øÇÑ À¯ÀüÀÚ ÆíÁý ¹× Ä¡·á¸¦ ³Ñ¾î ¿©·¯ ºÐ¾ß¿¡ ÀÀ¿ëµÇ°í ÀÖ´Ù. ÀÌ ±Û¿¡¼­´Â CRISPR-Cas¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ ´Ù¾çÇÑ ºÐ¾ßÀÇ ÀÀ¿ë ÇöȲÀ» °£´ÜÈ÷ ¼Ò°³ÇÏ°íÀÚ ÇÑ´Ù.

CRISPR-Cas¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ ¼¼Æ÷ ³»¿¡ »ç°Ç ¹× µ¥ÀÌÅÍ ±â·Ï »ý¼º

»ý¸í°úÇÐ ¿¬±¸¿¡¼­ ´Ü¹éÁú, mRNA, DNAµî ¹«¾ùÀ» ºÐ¼®ÇϵçÁö, ¿ì¸®´Â ºÐ¼®ÇÏ´Â ±× ½ÃÁ¡ÀÇ °Í¸¸À» ºÐ¼®ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. ½Ç½Ã°£ »ý¸íÇö»ó ºÐ¼® ±â¹ýÀÌ ¸¹ÀÌ °³¹ßµÇ¾î ÀÖÁö¸¸, ¼¼Æ÷¸¦ Æı«ÇÏÁö ¾Ê´Â À̹Ì¡ ±â¹ýÀÌ ÁֵǸç, ÀÌ·¯ÇÑ ±â¹ýÀÌ ¾Ë·ÁÁÙ ¼ö ÀÖ´Â Á¤º¸´Â ´ë°³ ÇÑÁ¤ÀûÀÌ´Ù. ÀÌ·± ÇѰ踦 ±Øº¹Çϱâ À§ÇØ ¿¬±¸ÀÚµéÀº CRISPR-Cas¸¦ ÀÌ¿ëÇØ ¼¼Æ÷°¡ ƯÁ¤ »ç°Ç¿¡ ³ëÃâµÇ¾úÀ» ¶§ ¼¼Æ÷ÀÇ DNA¿¡ À¯Àü °¡´ÉÇÑ º¯À̸¦ À¯µµÇÔÀ¸·Î¼­ DNA ¿°±â¼­¿­ º¯ÀÌÀÇ ÇüÅ·Π¼¼Æ÷°¡ ½º½º·Î °ú°Å »ç°ÇÀ» "±â¾ï"ÇÒ ¼ö ÀÖ´Â ¹æ¹ýµéÀ» °í¾ÈÇس´Ù[1].

Self targeting/homing guide RNA (gRNA)¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ lineage tracing

CRISPR-Cas¸¦ ÀÌ¿ëÇØ lineage tracingÀ» ÇÏ´Â ±â¹ýµéÀÌ ¿©·µ °³¹ßµÇ¾ú´Ù. lineage tracingÀ̶õ ¹ß»ýÇÐ ¹× ¾Ï»ý¹°Çп¡¼­ ÀÚÁÖ ¾²ÀÌ´Â ±â¹ýÀ¸·Î ´Ù¼¼Æ÷»ý¹°/Á¶Á÷¿¡¼­ °¢ ¼¼Æ÷ÀÇ Á·º¸¸¦ ±×¸®´Â ±â¹ýÀÌ´Ù. ¿¹»Û²¿¸¶¼±ÃæÀÇ 959°³ÀÇ °¢ ü¼¼Æ÷ÀÇ Á·º¸¸¦ ±×·Á³½ °ÍÀÌ ´ëÇ¥ÀûÀÎ ¿¹ÀÌ´Ù[2]. CRISPR-Cas¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ lineage tracing ±â¹ýµéÀº °øÅëÀûÀ¸·Î ¼¼Æ÷°¡ Cas9À¸·Î ƯÁ¤ÇÑ Áö³ð DNA¿¡ indel µ¹¿¬º¯À̸¦ ¿©·¯ ¹ø Áö¼ÓÀûÀ¸·Î ÀÏÀ¸Å°µµ·Ï À¯µµÇÑ´Ù. Indel µ¹¿¬º¯ÀÌ¿¡ ÀÇÇÑ ¿°±â¼­¿­ º¯ÀÌ´Â ¹«ÀÛÀ§ÀûÀ̹ǷÎ, °°Àº gRNA·Î À¯ÀüÀÚ ÆíÁýÀÌ µÇ¾îµµ ¿°±â¼­¿­ ¼öÁØÀÇ º¯ÀÌ °á°ú´Â ¼­·Î ´Ù¸£´Ù. ¼­·Î ¿°±â¼­¿­ ¼öÁØ¿¡¼­ indel µ¹¿¬º¯ÀÌÀÇ °á°ú°¡ ´Ù¸¥ °ÍÀº ¼¼Æ÷¸¶´Ù ¼­·Î ´Ù¸¥ “¹ÙÄڵ唰¡ »õ°ÜÁø °ÍÀ¸·Î »ý°¢ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. Â÷¼¼´ë¿°±â¼­¿­ (Next Generation Sequencing, NGS) ºÐ¼® ȤÀº FISH¸¦ ÀÌ¿ëÇØ ÀÌ ¹ÙÄڵ带 ÃßÀûÇÏ¸é °¢ ¼¼Æ÷°¡ ¾î´À ¼¼Æ÷ÀÇ ºÐ¿­¿¡ ÀÇÇØ ¸¸µé¾îÁø °ÍÀÎÁö Á·º¸¸¦ ¸¸µé¾î³¾ ¼ö ÀÖ´Ù. ÇÑ gRNA·Îµµ ¿©·¯ ¹øÀÇ indel µ¹¿¬º¯À̸¦ À¯µµÇϱâ À§ÇØ gRNA°¡ ÆíÁýÇÒ ¼ö Àִ Ÿ°Ù DNA ¼­¿­ ¿©·¯ °³¸¦ ¼¼Æ÷ÀÇ Áö³ð¿¡ ÆíÀÔ½ÃÅ°´Â ¹æ¹ýÀ» ¾²±âµµ ÇÏÁö¸¸[3-5], °³ÀÎÀûÀ¸·Î ƯÈ÷ âÀÇÀûÀ̶ó »ý°¢ÇÏ´Â self-targeting/homing gRNA¸¦ ¼Ò°³ÇÏ°íÀÚ ÇÑ´Ù[6, 7].

Cas9ÀÌ gRNA¿¡ »óº¸ÀûÀÎ ¿°±â¼­¿­À» °¡Áø DNA¸¦ ÀÚ¸¥´Ù´Â °ÍÀº ¸ðµÎ ¾Ë°íÀÖ´Ù. ±×·¸´Ù¸é gRNA°¡ ¹ßÇöµÇ´Â DNA À§Ä¡´Â gRNA¿Í ¿Ïº®È÷ »óº¸ÀûÀÎ ¿°±â¼­¿­À» °¡Áö°íÀִµ¥ ¿Ö À߸®Áö ¾ÊÀ»±î? SpCas9Àº gRNA°¡ ÀÎÁöÇÏ´Â ¼­¿­ ÀÇ 3’-¿·¿¡ NGG PAMÀÌ ÀÖ¾î¾ß¸¸ DNA Àý´ÜÀÌ °¡´ÉÇѵ¥, gRNA¸¦ ¹ßÇöÇÏ´Â DNA´Â spacer ¼­¿­ÀÇ 3’- ¿·ÀÌ gRNAÀÇ constant repeat sequenceÀÎ –GTT·Î ½ÃÀÛÀÌ µÇ¾î PAMÀÌ ¾ø±â ¶§¹®¿¡ Àý´ÜÀÌ ºÒ°¡´ÉÇÏ´Ù. ±×·±µ¥ gRNAÀÇ repeat sequence´Â ÀϺΠ¿°±â¼­¿­ÀÇ º¯À̸¦ ÀÏÀ¸Äѵµ Cas9°ú °áÇÕ ¹× DNA Àý´Ü À¯µµ°¡ °¡´ÉÇÑ °ÍÀ¸·Î ¾Ë·ÁÁ® ÀÖ´Ù. ±×·¸´Ù¸é gRNAÀÇ repeat sequence¸¦ –GGG·Î ½ÃÀÛÇÏ°Ô ¸¸µé¾î PAMÀÌ ±¸ºñµÇ°Ô ÇÏ¸é ¾î¶³±î? ¿¬±¸ °á°ú repeat sequence°¡ –GGG·Î ½ÃÀÛÇÏ´Â gRNAµµ Cas9°ú °áÇÕÇÏ°í DNA Àý´Ü¿¡ °ü¿©Çϴµ¥ ¹®Á¦°¡ ¾ø¾î¼­ ½º½º·Î ÀÚ½ÅÀÌ ¹ßÇöµÈ DNA À§Ä¡¸¦ Àý´ÜÇÔÀÌ ¹àÇôÁ³´Ù. ÀÌ °æ¿ì gRNAÀÇ ¿°±â¼­¿­ÀÌ ¹Ù²îÁö¸¸ °è¼Ó ¹ßÇöÀº µÇ¹Ç·Î ¹Ù²î°Ô µÈ DNA ¼­¿­¿¡ ¸Â´Â gRNA°¡ °á±¹ ¹ßÇöµÇ¾î ´Ù½Ã Àý´ÜÀÌ °¡´ÉÇÏ´Ù. °á±¹ PAM ÀÚü°¡ indel µ¹¿¬º¯ÀÌ¿¡ ÀÇÇØ ¾ø¾îÁöÁö ¾Ê´Â ÇÑ gRNA°¡ ½º½º·Î ¹ßÇöµÈ DNA À§Ä¡¿¡ °è¼Ó indel µ¹¿¬º¯À̸¦ À¯µµÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. ÀÌ·¸°Ô ¼³°èµÈ self-targeting/homing gRNA´Â ÇϳªÀÇ gRNA·Îµµ ÀÌÀüº¸´Ù ÈξÀ ¸¹Àº Á¾·ùÀÇ µ¹¿¬º¯À̸¦ ¾ç¼ºÇÒ ¼ö ÀÖ°í, À̸¦ ÅëÇØ »õ³¢ »ýÁãÀÇ ¹ß»ý °úÁ¤ÀÇ ¸ðµç ¼¼Æ÷ÀÇ lineage tracingÀ» Çس»¾ú´Ù[8].

ÇöÀç CRISPR-Cas¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ lineage tracing ±â¹ýÀº Á¶Á÷À» Æı«ÇÏ¿© Áö³ð DNA ÃßÃâÀÌ ÇÊ¿äÇϱ⠶§¹®¿¡ ¿©·¯ ±â¼úÀÇ ¹ßÀü[4]¿¡µµ lineage tracing µÈ ¼¼Æ÷µéÀÇ Á¾·ù (identity)¸¸À» ¾Ë ¼ö ÀÖÀ» »Ó À§Ä¡¸¦ ¾Ë ¼ö´Â ¾ø´Ù. ¹ß»ýÇÐÀÇ ÀÔÀå¿¡¼± ÇâÈÄ in situ ¼öÁØ¿¡¼­ÀÇ CRISPR-Cas¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ lineage tracing ±â¹ýÀÇ °³¹ßÀ» ±â´ëÇÑ´Ù.

-¼¼Æ÷ ¾È¿¡ µðÁöÅÐ µ¥ÀÌÅÍ ÀúÀå

DNA´Â »ý¹°ÀÇ ±â¿ø¿¡¼­ºÎÅÍ ¾²¿©¿Â °¡Àå ¿À·¡µÈ µ¥ÀÌÅÍ ÀúÀå¸ÅüÀÌ´Ù. DNA´Â È­ÇÐÀûÀ¸·Î ¾ÈÁ¤ÇÏ¸ç ¼¼Æ÷ÀÇ Áö³ð¿¡ ³Ö¾îÁÖ¸é ¿µ±¸ º¸Á¸µÇ¸ç º¹»çµµ ÇØÁÖ°í ¾ÈÀÇ ³»¿ëÀ» ±¸Çö (À¯ÀüÀÚ ¹ßÇö) ÇØÁֱ⵵ ÇÑ´Ù. Çϳª ´ÜÁ¡ÀÌ ÀÖ´Ù¸é ¼¼Æ÷ ¾ÈÀÇ DNA¿¡ ´Ù¸¥ DNA¸¦ Ãß°¡Çϰųª ±âÁ¸ DNAÀÇ ¼­¿­À» ¹Ù²Ù´Â °ÍÀÌ ½±Áö ¾Ê´Ù´Â °ÍÀÌ´Ù.

±×·± Á¡¿¡¼­ CRISPR-Cas´Â DNA µ¥ÀÌÅÍ ÆíÁýÀ» °¡´ÉÄÉ ÇØÁÙ ¼ö ÀÖ´Ù. CRISPRÀ» ÅëÇØ ¹ÚÅ׸®¾Æ°¡ ¹ÚÅ׸®¿ÀÆÄÁö(ÆÄÁö)¿¡ ÀûÀÀ¸é¿ªÀ» °¡Áö°Ô ÇÏ´Â °úÁ¤À» »ìÆ캸ÀÚ. Cas1-Cas2°¡ ¼¼Æ÷¿¡ ħÀÔÇÑ ÆÄÁö Áö³ðÀÇ ÀϺθ¦ ¹ÚÅ׸®¾Æ Áö³ðÀÇ CRISPR array¿¡ ÆíÀÔ½ÃÄÑ ¹ÚÅ׸®¾Æ°¡ ħÀÔÇÑ ÆÄÁö¸¦ '±â¾ï'ÇÏ°í, ÀÌ°ÍÀ» gRNA·Î ¹ßÇö½ÃÅ´À¸·Î¼­ ÇØ´ç DNA ¼­¿­À» °¡Áø ÆÄÁö¿¡ ´ëÇÑ ¸é¿ªÀ» °¡Áø´Ù. ¿¬±¸ÀÚµéÀº ¹ÚÅ׸®¾Æ°¡ Cas1-Cas2¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© ÀÓÀÇÀÇ ¿°±â¼­¿­ÀÇ ÆÄÁö Áö³ðÀ» "±â¾ï"ÇÏ´Â °Í¿¡ ÁÖ¸ñÇÏ¿©, Cas1-Cas2¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© ¹ÚÅ׸®¾Æ¿¡ µðÁöÅÐ µ¥ÀÌÅ͸¦ ÀÛ¼º ¹× ÀúÀåÇÏ´Â µ¥¿¡ ¼º°øÇÏ¿´´Ù[9, 10]. ¿¬±¸ÀÚµéÀº 0°ú 1·Î ³ªÅ¸³»´Â ÀÓÀÇÀÇ µðÁöÅÐ µ¥ÀÌÅ͸¦ DNA ¿°±â¼­¿­·Î º¯È¯ÇÏ°í, ÀÌ°ÍÀ» Cas1-Cas2¸¦ ¹ßÇöÇÏ´Â ¹ÚÅ׸®¾Æ¿¡ Àü±âõ°ø¹ýÀ¸·Î Àü´ÞÇß´Ù. Cas1-Cas2¿¡ ÀÇÇØ ¹ÚÅ׸®¾ÆÀÇ CRISPR array¿¡ ÀúÀåµÈ µ¥ÀÌÅÍ´Â NGS¸¦ ÀÌ¿ëÇØ ºÒ·¯¿À±â°¡ °¡´ÉÇϸç, ÀÌ°ÍÀ» ´Ù½Ã ÄÄÇ»ÅÍ µ¥ÀÌÅÍ·Î º¯È¯À» Çϸé, µðÁöÅÐ À̹ÌÁö³ª µ¿¿µ»óÀ» ´Ù½Ã ±¸ÇöÇÒ ¼ö ÀÖÀ½À» º¸¿´´Ù.

DNA¿¡ µ¥ÀÌÅ͸¦ ÀúÀåÇÑ´Ù´Ï Ç㹫¸Í¶ûÇÏ°Ô ´À²¸Áú ¼öµµ ÀÖ´Ù. ÇÏÁö¸¸ ¿ì¸®´Â ÇöÀç ¸ÅÀÏ 250¸¸ Å׶ó¹ÙÀÌÆ®ÀÇ »õ·Î¿î µ¥ÀÌÅÍ°¡ »ý±â´Â µ¥ÀÌÅÍÀÇ È«¼ö ¼Ó¿¡ »ì°í ÀÖ°í, ¾ðÁ¨°¡ ±âÁ¸ ÀúÀå¸Åü¸¸À¸·Î´Â µ¥ÀÌÅÍ ÀúÀåÀÇ ÇÑ°è°¡ ¿Ã ¼ö ÀÖ´Ù. ¹°·Ð À§ ¿¬±¸¿¡¼­ ÀúÀåÇÑ µðÁöÅÐ µ¥ÀÌÅÍ´Â 2.6ų·Î¹ÙÀÌÆ®, 5ÇÁ·¹ÀÓÀÇ ÀÛÀº Èæ¹é µ¿¿µ»óÀÏ »ÓÀÌ¸ç ¾ÆÁ÷ ¸¹Àº ¹ßÀüÀÌ ÇÊ¿äÇÏ´Ù. ÇâÈÄ DNA¿¡ ±â¹ÝÇÑ µ¥ÀÌÅÍ ÀúÀåÀÇ ¹ßÀü°ú ¹Ì·¡¸¦ ±â´ëÇØ º»´Ù.

½Å¾à Ÿ°Ù ¹ß±¼

CRISPR-Cas¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ ±â´ÉÀ¯ÀüüÇÐ ¿¬±¸ ¹× ½Å¾à Ÿ°Ù ¹ß±¼ ¿¬±¸µµ ÇöÀç È°¹ßÈ÷ ÁøÇàÁßÀÌ´Ù. ƯÁ¤ Ç¥ÇöÇüÀ» À¯µµÇÏ´Â »õ·Î¿î À¯ÀüÀÚ¸¦ ã´Â ½ºÅ©¸®´×Àº À̹ø ¼¼±â ÃÊ¿¡¸¸ Çصµ °Å´ëÇÑ Àåºñ°¡ ÇÊ¿äÇÑ ºñ½Î°í ¾î·Á¿î ¿¬±¸¿´Áö¸¸, NGS¿Í ÇÔ²² °¡´ÉÇØÁø Pooled ½ºÅ©¸®´× ±â¹ýÀ» ÅëÇØ °³º° ½ÇÇè½Ç¿¡¼­µµ °¡´ÉÇØÁ³´Ù. Pooled ½ºÅ©¸®´× ±â¹ýÀº Èĺ¸À¯ÀüÀÚµéÀ» °á¼Õ½Ãų ¼ö ÀÖ´Â gRNA¸¦ ¹ßÇö½ÃÅ°´Â lentivirus°¡ ¸ðµÎ ¼¯¿©ÀÖ´Â »óÅ·Π¼¼Æ÷¿¡ ó¸®ÇÑ´Ù. ÀÌ °á°ú·Î °¢ ¼¼Æ÷µéÀº ¼­·Î ´Ù¸¥ À¯ÀüÀÚ°¡ °¢°¢ °á¼ÕµÈ ä·Î ¼­·Î ¼¯¿©¼­ ¹è¾çµÈ´Ù. ¸¶Ä¡ ¾ß»ýÀÇ ÀûÀÚ»ýÁ¸ ¹ýĢó·³ ¼¼Æ÷µéÀÌ ¾î¶² À¯ÀüÀÚ°¡ °á¼ÕµÇ¾ú³ª¿¡ µû¶ó »ýÁ¸ ¹× Áõ½Ä ¼Óµµ°¡ ´Ù¸£¹Ç·Î ½Ã°£ÀÌ Áö³ª¸é¼­ ƯÁ¤ À¯ÀüÀÚ°¡ °á¼ÕµÈ ¼¼Æ÷µéÀÇ ºóµµ°¡ º¯È­ÇÑ´Ù. NGS ºÐ¼®À» ÅëÇØ ¾î¶² gRNA°¡ ¹ßÇöµÇ´Â ¼¼Æ÷µéÀÌ »ýÁ¸ ȤÀº »ç¸êµÇ¾ú´ÂÁö °¢°¢ÀÇ ºóµµ º¯È­¸¦ È®ÀÎÇÔÀ¸·Î¼­ ¼¼Æ÷ »ýÁ¸ ¹× Áõ½Ä¿¡ °ü¿©µÈ À¯ÀüÀÚ¸¦ ãÀ» ¼ö ÀÖ´Ù. ´Ü¼øÈ÷ ¼¼Æ÷ »ýÁ¸ ¹× Áõ½Ä¿¡ °ü¿©µÈ À¯ÀüÀÚ ¹ß±¼ÇÏ´Â °Í»Ó¸¸ ¾Æ´Ï¶ó Ç×¾ÏÁ¦¸¦ ó¸®Çؼ­ Ç×¾ÏÁ¦ ³»¼ºÀ» ¾ø¾Ù ¼ö ÀÖ´Â À¯ÀüÀÚ¸¦ ã´Â´Ù°Å³ª, ƯÁ¤ À¯ÀüÀÚÀÇ ¹ßÇöÀ» Çü±¤À¸·Î º¼ ¼ö Àִ ǥÁö´Ü¹éÁúÀ» ÀÌ¿ëÇØ Æ¯Á¤ À¯ÀüÀÚÀÇ ¹ßÇöÀ» À¯µµÇÏ´Â À¯ÀüÀÚ¸¦ ãÀº ½ºÅ©¸®´×µµ °¡´ÉÇÏ´Ù.

CRISPR-Cas9À» ÀÌ¿ëÇÑ knockout ½ºÅ©¸®´×Àº short hairpin (shRNA)¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ knockdown ½ºÅ©¸®´×¿¡ ºñÇØ ¸î°¡Áö ÀåÁ¡À» °¡Áö°í ÀÖ´Ù. CRISPR ½ºÅ©¸®´×Àº À¯ÀüÀÚ°¡ ¿ÏÀü °á¼ÕµÇ´Â ¸¸Å­ shRNA ½ºÅ©¸®´×¿¡ ºñÇØ ÇüÁúÀÇ º¯È­°¡ ÈξÀ ±ØÀûÀÌ°í ÀÏ°ü¼ºÀÌ ³ô¾Æ¼­ ´õ ¸¹Àº À¯È¿À¯ÀüÀÚ (hits)¸¦ ã¾Æ³¾ ¼ö ÀÖ´Ù[11]. ¶ÇÇÑ shRNA¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ ½ºÅ©¸®´×Àº knockdown ½ºÅ©¸®´× ¸¸ÀÌ °¡´ÉÇϳª, CRISPR ½ºÅ©¸®´×Àº, wild type Cas9À» ÀÌ¿ëÇÑ knockout screening »Ó¸¸ ¾Æ´Ï¶ó, À¯ÀüÀÚ °¡À§ È¿¼Ò ´É·ÂÀÌ ¾ø´Â dCas9¿¡ VP64¿Í °°Àº Àü»çÈ°¼ºÈ­¿ä¼Ò³ª, KRAB°ú °°Àº Àü»ç¾ïÁ¦¿ä¼Ò¸¦ °áÇÕ½ÃŲ ´Ü¹éÁúÀ» ÀÌ¿ëÇÏ¸é °¢°¢ gene activation ½ºÅ©¸®´×À̳ª knockdown ½ºÅ©¸®´×µµ °¡´ÉÇØ ÈξÀ À¯¿ë¼ºÀÌ Å©´Ù.

¸¹Àº ¿¬±¸ÀÚµéÀÌ CRISPR ½ºÅ©¸®´×À» ÀÌ¿ëÇÑ ±â´ÉÀ¯ÀüüÇÐ ¿¬±¸¸¦ ÇÏ°í ÀÖÀ¸¸ç, MIT/HarvardÀÇ Broad institute (https://depmap.org/portal/) ³ª ¿µ±¹ÀÇ Sanger institute (https://score.depmap.sanger.ac.uk/,[12])¿¡¼­´Â ¼ö¹é°³ ¼¼Æ÷ÁÖ¿¡¼­ Áö³ð ÀüüÀÇ CRISPR ½ºÅ©¸®´×À» ¼öÇàÇÏ¿´°í ±× °á°ú¸¦ °ø°³ÇÏ¿´´Ù. Pooled CRISPR ½ºÅ©¸®´×µµ ÇÑ°è°¡ ÀÖ´Ù. ½ºÅ©¸®´× °á°ú¸¦ NGS¿¡ ÀÇÁ¸Çϱ⠶§¹®¿¡, ¼¼Æ÷ »ýÁ¸/»ç¸ê, Ç¥ÁöÀ¯ÀüÀÚ ¹ßÇö °°Àº °£´ÜÇÑ Â÷À̸¸ÀÌ ºÐ¼® °¡´ÉÇÏ´Ù. ±×¸®°í ÇÑ ¼¼Æ÷´ç ÇϳªÀÇ À¯ÀüÀÚ¸¸ °á¼Õ½ÃÄÑ ±× ÇüÁúÀ» ½ºÅ©¸®´×ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. ÀÌ °°Àº ÇÑ°èÁ¡À» µ¹ÆÄÇϱâ À§ÇÑ ¿©·¯ Á¢±ÙÀÌ ¼º°ú¸¦ ³»°í ÀÖ´Ù[13, 14]. ÀÌ °á°úµéÀ» ÀÌ¿ëÇÑ ´õ È¿°úÀûÀΠǥÀûÄ¡·áÁ¦ÀÇ °³¹ßÀ» ±â´ëÇÑ´Ù.

¹ÙÀÌ·¯½º °¨¿° Áø´Ü

CRISPR-Cas¸¦ ÀÌ¿ëÇØ ÇöÀç À¯ÇàÇÏ°í ÀÖ´Â Äڷγª19¿Í °°Àº ¹ÙÀÌ·¯½º¸¦ Áø´ÜÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. CRISPR-Cas¸¦ ÀÌ¿ëÇϸé gRNA ¼³°è·Î ÀÓÀÇÀÇ ¼­¿­À» °¡Áø ÇÙ»êÀ» Àý´ÜÇÏ´Â nuclease¸¦ ¼Õ½±°Ô ¸¸µé ¼ö Àֱ⠶§¹®¿¡, CasÀÇ nuclease È°¼ºÀ» Á¤·®È­ÇÒ ¼ö ÀÖ´Â ±â¹ý¸¸ °³¹ßÇÏ¸é ¾î¶² ¹ÙÀÌ·¯½ºµç ¼Õ½±°Ô °ËÃâÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. CRISPR-Cas¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ ÇÙ»ê °ËÃâ¹ýÀº Å©°Ô Cas9, Cas13 ȤÀº Cas12¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ °ÍÀ¸·Î ³ª´­ ¼ö ÀÖ´Ù. Çã¿ëµÈ Áö¸é »ó ÀÌ Áß Cas13À» ÀÌ¿ëÇÑ ÇÙ»ê °ËÃâ¹ý¿¡ ÁÖ¸ñÇغ¸°Ú´Ù[15],.

RNA¸¦ Àý´ÜÇÏ´Â Cas13Àº gRNA¿¡ °áÇÕÇϴ Ÿ°Ù RNA¸¦ ÀÚ¸¦ ¶§, ±× RNA »Ó¸¸ ¾Æ´Ï¶ó ÁÖÀ§¿¡ ÀÖ´Â ´Ù¸¥ RNAµµ ¿°±â¼­¿­°ú °ü°è ¾øÀÌ ÀÚ¸£´Â collateral È°¼ºÀ» °¡Áö°í ÀÖ´Ù[16]. À̸¦ È°¿ëÇÑ ¹ÙÀÌ·¯½º Áø´Ü Å°Æ®´Â Àý´ÜµÇ¾úÀ» ¶§ Çü±¤À» ¶é ¼ö ÀÖ´Â probe¿Í °ËÃâÇÏ°íÀÚ ÇÏ´Â RNA¿Í °áÇÕÇÏ´Â gRNA, ±×¸®°í Cas13À¸·Î ±¸¼ºµÇ¾îÀÖ´Ù. ºÐ¼® ½Ã·á¿¡ °ËÃâÇÏ°íÀÚ ÇÏ´Â RNA°¡ ÀÖ´Ù¸é Cas13ÀÇ collateral È°¼º¿¡ ÀÇÇØ probe°¡ Àý´ÜµÇ¾î Çü±¤À» ¶ç°Ô µÈ´Ù[17-19]. À̸¦ ÅëÇØ ½Ã·á¿¡ °ËÃâÇÏ°íÀÚ ÇÏ´Â ¹ÙÀÌ·¯½º RNA/DNAÀÇ Á¸Àç ¿©ºÎ¸¦ ÇöÀç PCRÀ» ÀÌ¿ëÇÑ ÇÙ»ê °ËÃâÀÇ ¹Î°¨µµ¿¡ ºñ°ßµÉ Á¤µµÀÎ atto (10-18)M ¼öÁØÀÇ ¹Î°¨µµ·Î °ËÃâÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù.

CRISPR-Cas¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ Áø´ÜÀº 37µµ¿¡¼­ °¡´ÉÇØ PCR ±â¹Ý Áø´ÜÅ°Æ®¿¡ ºñÇØ Áø´ÜÀåºñ°¡ ¿­¾ÇÇÑ °³¹ßµµ»ó±¹ ¹× Ãֺ󱹿¡¼­µµ ÇöÀå¿¡¼­ ¹Ù·Î, ´õ ºü¸¥ ½Ã°£ ³»¿¡ ½Å·Ú¼º ÀÖ´Â °á°ú¸¦ ³¾ ¼ö ÀÖ´Â ÀåÁ¡ÀÌ ÀÖ´Ù. ÇöÀç Äڷγª19¿Í °°Àº ±Þ¹ÚÇÑ »óȲ¿¡ Cas13À» ÀÌ¿ëÇÑ Áø´ÜÅ°Æ®°¡ ´çÀå »ó¿ëÈ­µÇ±â´Â ¾î·Á¿ï °ÍÀ¸·Î º¸À̳ª, ÃÖ±Ù Sherlock Biosciences ¿Í °°Àº ½ºÅ¸Æ®¾÷ ȸ»ç¿¡¼­ °³¹ßÇÑ CRISPR-Cas¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ Äڷγª19 Áø´ÜÅ°Æ®°¡ ¹Ì±¹ FDAÀÇ ±ä±Þ½ÂÀÎÀ» ¹Þ´Â µî ÇâÈÄ ¹ÙÀÌ·¯½ºÀÇ Áø´ÜÅ°Æ®ÀÇ ±âÁØÀÌ ¹Ù²ð °¡´É¼ºÀÌ ÀÖ´Ù°í »ý°¢ÇÑ´Ù.

À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺긦 ÀÌ¿ëÇÑ »ýÅ°è Á¶Àý

À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺ê¶õ heterozygous diploid °³Ã¼¿¡¼­ ÇÑ ÂÊÀÇ alleleÀÌ ´Ù¸¥ ÂÊÀÇ alleleÀ» ÀڽŰú °°Àº °ÍÀ¸·Î ¹Ù²Ù°Ô ¸¸µå´Â À¯Àü°øÇÐÀû ÀåÄ¡ÀÌ´Ù. ¿¹¸¦ µé¾î À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺긦 °¡Áø allele¸¦ “D” Á¤»ó alleleÀ» wild type (WT)À¸·Î ¸í¸íÇϸé, D/WT °³Ã¼ÀÇ WT alleleÀÌ D allele¿¡ ÀÇÇØ ÆíÁýµÊÀ¸·Î¼­ D/D À¯ÀüÀÚÇüÀ» °¡Áö°Ô µÈ´Ù. ½ÇÇè½Ç¿¡¼­ D alleleÀ» °¡Áø °³Ã¼¸¦ Á¦ÀÛÇÏ¿© ¹æ»çÇϸé, óÀ½ ¹æ»çÇÑ °³Ã¼¼ö°¡ Àû´õ¶óµµ ±âÁ¸ ¾ß»ý °³Ã¼±º°ú À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺긦 °¡Áø °³Ã¼ »çÀÌÀÇ »õ³¢µéÀº ¸ðµÎ À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺긦 °¡Áö°Ô µÇ¾î, À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺갡 °³Ã¼±ºÀÇ À¯ÀüÀÚÇüÀ» Àá½ÄÇÑ´Ù. À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺ê´Â 1960³â´ë¿¡ Á¦¾ÈµÈ ¾ÆÀ̵ð¾î·Î[20], ¹ø½Ä·ÂÀ» ¶³¾î¶ß¸®´Â À¯ÀüÀÚÇüÀ» À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺꿡 ¿¬°áÇÏ¸é °³Ã¼±ºÀÇ ¹ø½Ä·ÂÀ» ÀüüÀûÀ¸·Î °¨¼Ò½Ãų ¼ö ÀÖÀ» °ÍÀ̶ó ÁÖÀåµÇ¾úÀ¸³ª, ÀÌ°ÍÀ» °¡´ÉÄÉÇÏ´Â À¯Àü°øÇÐÀû ±â¹ýÀÌ Á¸ÀçÇÏÁö ¾Ê¾Ò´Ù.

ÀÌÁ¨ CRISPR-Cas9À¸·Î À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺갡 ½±°Ô ±¸ÇöµÉ ¼ö ÀÖ´Ù. CRISPR-Cas9À» ÀÌ¿ëÇÑ À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺ê´Â ÀÚ¿¬ÀÇ À̱âÀû À¯ÀüÀÚ(selfish gene)ÀÇ ÀÏÁ¾ÀÎ homing endonuclease gene (HEG)À» ¸ð»çÇÏ°í ÀÖ´Ù[21]. Cas9À» ÀÌ¿ëÇÑ À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺ê´Â ³»°¡ Ÿ°ÙÇÏ°íÀÚ ÇÏ´Â WT allele°ú °°Àº ¿°±â¼­¿­À» °¡Áø homology armÀ» ¾çÂÊ ³¡¿¡ °¡Áö°í ÀÖ°í, ±× »çÀÌ¿¡ WT alleleÀ» Àý´ÜÇÒ ¼ö ÀÖ´Â gRNA¿Í Cas9À» ¹ßÇöÇÏ´Â DNA¸¦ ¼³°èÇÑ´Ù. ÀÌ À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺ê allele°ú WT alleleÀÌ ÇÔ²² ÇÑ °³Ã¼¿¡ ÀÖÀ¸¸é À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺꿡 ÀÖ´Â Cas9¿¡ ÀÇÇØ WT alleleÀÌ Àý´ÜµÇ°Ô µÇ°í, ÀÌ°ÍÀÌ ´Ù½Ã ¼öº¹ (repair)µÉ ¶§, À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺갡 °¡Áö°í ÀÖ´Â homology armÀ» ÀÌ¿ëÇØ homology directed repair (HDR)À» À¯µµÇÏ°Ô µÈ´Ù. °á±¹ ¼öº¹ ÈÄ¿¡´Â WT alleleÀÌ À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺ê allele·Î ¹Ù²î°Ô µÈ´Ù. ¿¬±¸ÀÚµéÀº À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺긦 homozygous µ¹¿¬º¯ÀÌ°¡ ÀϾÀ» ¶§ ¾ÏÄÆÀÇ ºÒÀÓÀ» À¯µµÇÏ´Â À¯ÀüÀÚ¿¡ ¼³°èÇß´Ù[22, 23]. ÀÌ °á°ú, ü¼¼Æ÷ »ó heterozygous ¾ÏÄÆ ¸ð±â´Â »ýÁ¸Àº ÇÏÁö¸¸ »ý½Ä¼¼Æ÷°¡ À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺꿡 ÀÇÇØ homozygous µ¹¿¬º¯ÀÌ°¡ µÇ¾î ¾ËÀ» ³ºÀ» ¼ö ¾ø°í, ¼öÄÆÀÌ °¡Áø À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺ê´Â »ý½Ä¼¼Æ÷°¡ homozygous µ¹¿¬º¯ÀÌÀÎ »óÅ¿¡¼­ ¸ð±â °³Ã¼±º ³»¿¡¼­ °è¼Ó ÆÛÁ®³ª°¡±â ¶§¹®¿¡ ÀüüÀûÀ¸·Î ¸ð±âÀÇ ¹ø½Ä·ÂÀÌ Å©°Ô °¨¼ÒÇÏ°Ô µÈ´Ù. ÀÌ °°Àº ¿¬±¸´Â ½ÇÇè½ÇÀÇ ÄÉÀÌÁö ¾È¿¡ °Ý¸®µÈ ¸ð±â °³Ã¼±º¿¡¼­ 7~11¼¼´ë À̳»¿¡ ¸ð±âÀÇ ¹ø½Ä·ÂÀÌ °ÅÀÇ »ç¶óÁüÀÌ È®ÀεǾú´Ù.

À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺ê´Â »ó´çÈ÷ Èï¹Ì·Î¿î ±â¼úÀÌÁö¸¸, »ýÅ°踦 ±³¶õ½Ãų ¼ö ÀÖ´Â ¾ÆÁÖ À§ÇèÇÑ ±â¼úÀ̱⵵ ÇÏ´Ù. ÃÖ¼ÒÇÑÀÇ ¾ÈÀü¼ºÀ» È®º¸ÇÏ´Â ÀåÄ¡µµ °³¹ßµÇ°í ÀÖÁö¸¸[24], À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺ê´Â ³Î¸® »ó¿ëÈ­µÇ±â´Â ¾î·Æ´Ù°í Àü¸ÁµÈ´Ù. ÇÏÁö¸¸ ¾ÆÇÁ¸®Ä«ÀÇ ºÎ¸£Å°³ªÆÄ¼Ò¿Í °°Àº ¸»¶ó¸®¿¡¿¡ ÀÇÇØ ¸ÅÇØ ¼ö ¸¸¸íÀÌ Á×´Â ±¹°¡¿¡¼­´Â À¯ÀüÀÚ µå¶óÀ̺긦 ÀÌ¿ëÇÑ ¸ð±â ÅðÄ¡°¡ ½ÇÇàµÇ°í ÀÖ´Ù. ¾î¼¸é Àΰ£¿¡°Ô ±ØÀûÀÎ ÇؾÇÀ» ³¢Ä¡´Â Á¾µé¿¡ ´ëÇؼ­´Â À¯ÀüÀÚ µå¶óÀÌºê ±â¼úÀÌ Àû¿ëµÉ ¼öµµ ÀÖÁö ¾ÊÀ»±î Á¶½É½º·¹ »ý°¢Çغ»´Ù.

¸ÎÀ½¸»

Çã¿ëµÈ Áö¸é »ó ¼Ò°³ÇÏÁö ¸øÇßÁö¸¸ CRISPR-Cas¿¡ ÀÇÇØ Á¶ÀýµÇ´Â ¾à¹°Àü´Þ/ÀüÀÚȸ·Î[25] µî ¼ö¸¹Àº âÀÇÀûÀÎ ¿µ°¨µéÀÌ Çö½ÇÀÌ µÇ°íÀÖ´Ù. CRISPR-Cas´Â ÇöÀç »ý¹°ÇÐÀÌ ÇÒ ¼ö ÀÖ´Â ¿¬±¸ÀÇ Àúº¯À» ³ÐÇû°í, À¯ÀüÀÚÄ¡·á°¡ ¾Æ´Ï´õ¶óµµ ¸¹Àº ÀÀ¿ëºÐ¾ß°¡ ÀÖ´Ù. Cas ´Ü¹éÁúµéÀº ±× À¯ÀüÀÚ °¡À§ÀÇ È°¼ºÀ» ÀÌ¿ëÇÑ ÀÀ¿ëµµ Áß¿äÇÏÁö¸¸, gRNA¿¡ ÀÇÇØ ³»°¡ ¿øÇÏ´Â ÀÓÀÇÀÇ ¿°±â¼­¿­À» °¡Áø Çٻ꿡 Cas ´Ü¹éÁúÀ» À§Ä¡½Ãų ¼ö ÀÖ´Ù´Â °Í¿¡ ¸Å·ÂÁ¡ÀÌ ÀÖ´Ù°í »ý°¢ÇÑ´Ù. ªÀº ¿°±â¼­¿­·Îµµ ¼öõ°¡Áö ´Ù¾ç¼ºÀ» È®º¸ÇÒ ¼ö ÀÖÀ¸¹Ç·Î ¼­·Î µ¶¸³ÀûÀÎ Á¶ÀýÀ» ¹Þ´Â "ºÎÇ°"À» »ý¸íü¿¡ ȤÀº (Áø´ÜÅ°Æ®, »ýüÀç·á¿Í °°ÀÌ) ¹«»ý¹°Ã¼¿¡ ¼³°èÇÒ ¼ö ÀÖ´Â Á¡¿¡ ÁÖ¸ñÇÑ ´Ù¾çÇÑ ÀÀ¿ëÀ» ±â´ëÇÑ´Ù.

Âü°í¹®Çå

  • [1]

    Sheth, R.U. and H.H. Wang, DNA-based memory devices for recording cellular events. Nature Reviews Genetics, 2018. 19(11): p. 718-732.

  • [2]

    Sulston, J.E., et al., The embryonic cell lineage of the nematode Caenorhabditis elegans. Developmental Biology, 1983. 100(1): p. 64-119.

  • [3]

    Spanjaard, B., et al., Simultaneous lineage tracing and cell-type identification using CRISPR–Cas9-induced genetic scars. Nature Biotechnology, 2018. 36: p. 469.

  • [4]

    Raj, B., et al., Simultaneous single-cell profiling of lineages and cell types in the vertebrate brain. Nature Biotechnology, 2018. 36(5): p. 442-450.

  • [5]

    Frieda, K.L., et al., Synthetic recording and in situ readout of lineage information in single cells. Nature, 2017. 541(7635): p. 107-111.

  • [6]

    Perli, S.D., C.H. Cui, and T.K. Lu, Continuous genetic recording with self-targeting CRISPR-Cas in human cells. Science, 2016. 353(6304).

  • [7]

    Kalhor, R., P. Mali, and G.M. Church, Rapidly evolving homing CRISPR barcodes. Nature Methods, 2017. 14(2): p. 195-200.

  • [8]

    Kalhor, R., et al., Developmental barcoding of whole mouse via homing CRISPR. Science, 2018. 361(6405): p. eaat9804.

  • [9]

    Shipman, S.L., et al., Molecular recordings by directed CRISPR spacer acquisition. Science, 2016. 353(6298): p. aaf1175.

  • [10]

    Shipman, S.L., et al., CRISPR–Cas encoding of a digital movie into the genomes of a population of living bacteria. Nature, 2017. 547(7663): p. 345-349.

  • [11]

    Shalem, O., et al., Genome-Scale CRISPR-Cas9 Knockout Screening in Human Cells. Science, 2014. 343(6166): p. 84.

  • [12]

    Behan, F.M., et al., Prioritization of cancer therapeutic targets using CRISPR–Cas9 screens. Nature, 2019. 568(7753): p. 511-516.

  • [13]

    Han, K., et al., Synergistic drug combinations for cancer identified in a CRISPR screen for pairwise genetic interactions. Nature biotechnology, 2017. 35(5): p. 463-474.

  • [14]

    Dixit, A., et al., Perturb-Seq: Dissecting Molecular Circuits with Scalable Single-Cell RNA Profiling of Pooled Genetic Screens. Cell, 2016. 167(7): p. 1853-1866.e17.

  • [15]

    Li, Y., et al., CRISPR/Cas Systems towards Next-Generation Biosensing. Trends in Biotechnology, 2019. 37(7): p. 730-743.

  • [16]

    Abudayyeh, O.O., et al., RNA targeting with CRISPR–Cas13. Nature, 2017. 550: p. 280.

  • [17]

    Gootenberg, J.S., et al., Nucleic acid detection with CRISPR-Cas13a/C2c2. Science, 2017: p. eaam9321.

  • [18]

    Gootenberg, J.S., et al., Multiplexed and portable nucleic acid detection platform with Cas13, Cas12a, and Csm6. Science, 2018. 360(6387): p. 439.

  • [19]

    Myhrvold, C., et al., Field-deployable viral diagnostics using CRISPR-Cas13. Science, 2018. 360(6387): p. 444.

  • [20]

    Curtis, C.F., Possible Use of Translocations to fix Desirable Genes in Insect Pest Populations. Nature, 1968. 218(5139): p. 368-369.

  • [21]

    Burt, A. and V. Koufopanou, Homing endonuclease genes: the rise and fall and rise again of a selfish element. Current Opinion in Genetics & Development, 2004. 14(6): p. 609-615.

  • [22]

    Hammond, A., et al., A CRISPR-Cas9 gene drive system targeting female reproduction in the malaria mosquito vector Anopheles gambiae. Nature Biotechnology, 2016. 34(1): p. 78-83.

  • [23]

    Kyrou, K., et al., A CRISPR–Cas9 gene drive targeting doublesex causes complete population suppression in caged Anopheles gambiae mosquitoes. Nature Biotechnology, 2018. 36(11): p. 1062-1066.

  • [24]

    DiCarlo, J.E., et al., Safeguarding CRISPR-Cas9 gene drives in yeast. Nature Biotechnology, 2015. 33(12): p. 1250-1255.

  • [25]

    English, M.A., et al., Programmable CRISPR-responsive smart materials. Science, 2019. 365(6455): p. 780.

ÀúÀÚ¾à·Â

  • 2004-2008

    KAIST »ý¸í°úÇаú, Çлç

  • 2008-2015

    KAIST »ý¸í°úÇаú, ¹Ú»ç

  • 2015-2016

    KAIST »ý¸í°úÇаú, Postdoc

  • 2016-2019

    MIT Research Lab of Electronics, Postdoc

  • 2019-ÇöÀç

    KIST È­ÇÐÅ°³ë¹Í½º¿¬±¸¼¾ÅÍ, ¼±ÀÓ¿¬±¸¿ø